这三天在JYL老师实验室学习了很多，师兄人是真不错

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农杆菌转化——delta-zein

1.2004年Won-Seok Kim和Hari B. Krishnan发表在Plant Biotechnology Journal的一篇文章。
作者把11 kDa methionine-rich delta-zein通过农杆菌转化到大豆种子中，希望提升大豆种子中含硫氨基酸含量但是失败了。

2.质粒构建使用了β-conglycinin α′-promoter，potato proteinase inhibitor gene 的terminator sequences中间夹TP，即β-conglycinin β-subunit transit peptide δ-zein。后面就接着cauliflower mosaic virus 35S promoter，非特异地在各个器官表达，bar抗除草剂基因和 nopaline synthase gene。
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3.做了Northern、Western确定有；各个器官做Northern、Western确认特异性。水溶部分、醇溶部分、总蛋白分别做Western确定保持了zein蛋白的醇溶性，而且发现醇溶部分确实增加了1.5-1.7倍，但是总量并没明显增加。分子克隆时在信号肽和δ-zein中有个突变位点，让成熟的δ-zein蛋白多了两个氨基酸，Western可以看出比阳性对照稍大。比较cDNA和N端序列找到了成熟δ-zein和信号肽裂解位点。确实两个加入的氨基酸在裂解位点之后。原位杂交说正义链反义链都有信号是非特异性的，但是反义链可以发现在维管束边上，这个结果居然能发出来。免疫组化染色先发现确实在维管束边上，又发现两种新蛋白体prontein body。然后又做了金颗粒的冷冻电镜给出这两种的结构。

4.讨论就以后写吧
More info: 不知道是不是原出处反正挂个链接

PCR

移液枪的使用：只能从大往小调；上枪头旋转一下；精密实验时可以反向加液；
做一次10μL的PCR，用2x的试剂，2.5μL的双蒸水，2μL模板，正反引物各0.5μL，然后丢到PCR仪里面预设好温度跑。同时配胶，一片小胶2.5g纯琼脂糖（比配培养基的好），缓冲液25mL（10：1），小心倒防止梳子处有气泡（如有，用手划拉掉）。注意EB污染区手套不能碰其它地方，也不能碰到自己，更不能不带专用手套在EB污染区操作。上样，如果后续要切胶就得上在右边。放到显色仪里面，先用白光摆好位置，再换UV拍照。（师兄跟我讲话去了导致有一条道引物加错了hhh）