今天做了构建质粒中的转化步骤，学习文献引索方法
构建质粒
质粒构建使用“无缝克隆”的方法，试剂盒链接,大肠杆菌转化使用的感受态细胞链接
首先在UV视野下切PCR跑出来的插入基因的胶（可以纯化和减少试剂消耗）。然后溶胶、把DNA洗出来，和线性化质粒与感受态大肠杆菌混合，冰上30min，热刺激1min（必须精确），在超净台稀释涂布平板。
原理
分子克隆有很多种，下列出几种
酶切连接
如Golden Gate法给一篇综述在这里可以通过连接失去酶切位点，而自连的不断被酶切，做到只要连接即一定成功。而且酶切和连接可以在同一个试管中进行。但是很贵。放一张图片。
Seamless无缝连接
Gibson Assembly
给一篇综述,NEB等公司在做，是用PCR在DNA末端加上同源序列然后同源重组。不需要特定的酶切位点。而且外切酶、聚合酶、连接酶都在同一个温度下能发挥作用。
In-Fusion
这个看起来也是一篇综述还没看，不知道和Gibson有什么区别，放张图。
Transgene
北京全式金公司，音译的，笑死我了。甚至说明书都要用英文，明明只有国内实验室才会用贵公司的试剂。本文看起来像是讲转基因而不是全式金hhh
Gateway
我又找到一篇综述等我看完再来讲讲是啥